miR-195在子宫内膜癌组织中的表达及其临床意义
摘 要：目的 探讨微小RNA-195(miR-195)在子宫内膜癌组织中的表达情况及其与子宫内膜癌患者临床病理特征的关系。方法 收集2012年1月—2017年1月河北北方学院附属第一医院收治的64例子宫内膜癌患者手术切除的子宫内膜癌组织和64例因子宫肌瘤行子宫全切术患者的正常子宫内膜组织,采用实时荧光定量聚合酶链反应检测子宫内膜癌组织和正常子宫内膜组织中miR-195的表达量,分析miR-195表达量与子宫内膜癌患者临床病理特征的关系。结果子宫内膜癌组织和正常子宫内膜组织中miR-195的表达量分别为0.42±0.12和1.05±0.18,子宫内膜癌组织中miR-195表达量明显低于正常子宫内膜组织(P<0.05);子宫内膜癌组织中miR-195表达量与患者FIGO分期、肌层浸润深度和淋巴结转移有关(P均<0.05),与患者年龄、肿瘤组织学类型及分化程度无关(P均>0.05)。结论 miR-195在子宫内膜癌中具有抑癌基因的特性,其作为抑癌基因可能参与了子宫内膜癌的发生、发展过程。
关键词：子宫内膜癌 miR-195 FIGO分期 肌层浸润深度 淋巴结转移
子宫内膜癌为女性生殖道恶性肿瘤,好发于围绝经期和绝经后女性,近年来其发病呈现出低龄化趋势[1-2]。目前子宫内膜癌的发病机制仍然不明,对该病进行分子机制的研究越来越受到妇科肿瘤医生的重视。微小RNA(miRNA)是一类存在于真核生物体内的非编码短链RNA小分子,其在多种肿瘤中均存在异常表达,与肿瘤细胞的生长增殖、侵袭迁移、转移、凋亡密切相关[3-4]。miR-195是由人类17号染色体的基因间隔区序列偏弱的miRNA,位于染色体17p13.1,其与肿瘤发生过程关系密切,在乳腺、肝脏、膀胱、胃肠道等脏器的癌组织中发现miR-195表达下调[5-7],但是关于miR-195在子宫内膜癌中的表达情况研究较少。本研究观察了子宫内膜癌组织中miR-195的表达情况及与子宫内膜癌患者临床病理学指标的关系,探讨了miR-195在子宫内膜癌发生、发展过程中的作用,现将结果报道如下。
1 资料和方法
1.1 一般资料
收集2012年1月—2017年1月在河北北方学院附属第一医院行手术切除术后病理证实为子宫内膜癌的64例患者资料,年龄35～67(57.2±8.4)岁;国际妇产科联盟(FIGO)分期[8]:Ⅰ～Ⅱ期30例,Ⅲ～Ⅳ期34例;组织分化程度:低分化24例,中高低分化40例;组织学类型:Ⅰ型37例,Ⅱ型27例;肌层浸润深度:≥1/2肌层30例,<1/2肌层34例;发生淋巴结转移28例。选择因子宫肌瘤行全子宫切除术术后病理证实为正常子宫内膜的64例患者作为对照,年龄35～65(56.8±8.1)岁。本研究经我院医学伦理委员会批准(W2020014),研究对象对本研究知情同意。
1.2 研究方法
将组织标本置于液氮中冷冻,然后移至-80 ℃冰箱中保存。采用实时荧光定量PCR法检测子宫内膜癌组织和正常子宫内膜组织中miR-195表达情况,分析miR-195表达量与子宫内膜癌患者临床病理特征的关系。
1.3 miR-195表达检测方法
取60 mg冰冻的组织标本,研磨后加入细胞裂解液,用TRIzol总RNA提取试剂盒(美国Invitrogen公司)提取细胞中总RNA。利用分光光度计测量提取的RNA吸光值计算浓度,总RNA吸光度比值在1.8～2.1,表明RNA纯度好。按照逆转录试剂盒(日本TaKaRa公司)说明书将总RNA逆转录成cDNA,以cDNA为模板进行实时PCR反应。严格按照RT-PCR试剂盒操作,取1 μL总RNA逆转录生成10 μL产物,各取5 μL逆转录产物加入20 μL的PCR体系中进行PCR扩增(miR-195及内参引物均由上海生工生物公司设计合成):miR-195引物序列上游为5’-ACACTCCAGCTGGGTAGCAGCACAGAAAT-3’,下游为5’-TGGTGTCGTGGAGTCG-3’,反应条件为95 ℃15 min,1个循环,95 ℃ 10 s,40个循环,60 ℃ 32 s,40个循环;内参U6引物序列上游为5’-CTCGCTTCGGCAGCACA-3’,下游为5’-AACGCTTCACGAATTTGCGT-3’。每个反应均设置3个复孔。使用PCR仪器软件获得Ct值,ΔCT=Ct(miR-195)- Ct(U6);ΔΔCT=ΔCT(癌组织)-ΔCT(正常子宫内膜组织),采用2-ΔΔCT方法计算子宫内膜癌组织与正常子宫内膜组织中miR-195相对表达量。
1.4 统计学方法
采用SPSS 17.0软件进行数据分析,符合正态分布计量资料以x¯±s表示,差异比较采用t检验。P<0.05为差异有统计学意义。
2 结 果
2.1 子宫内膜癌和正常子宫内膜组织中miR-195表达情况
子宫内膜癌组织中miR-195表达量为0.42±0.12,正常子宫内膜组织中为1.05±0.18。子宫内膜癌组织中miR-195的表达量明显低于正常子宫内膜组织(P<0.05)。
2.2 子宫内膜癌组织中miR-195的表达与患者临床病理特征的关系
不同年龄、组织学类型、分化程度患者子宫内膜癌组织中miR-195的表达量差异无统计学意义(P>0.05),不同FIGO分期、肌层浸润程度、淋巴结转移患者子宫内膜癌组织中miR-195的表达量比较差异有统计学意义(P<0.05)。见表1。
表1 子宫内膜癌组织中miR-195表达量与患者临床病理特征的关系(x¯±s)
指标 例数 miR-195表达量 t P
年龄 ≥55岁
<55岁 40
24 0.41±0.31
0.45±0.25 0.36 0.649
FIGO分期 Ⅰ～Ⅱ期
Ⅲ～Ⅳ期 30
34 0.48±0.31
0.28±0.21 2.07 0.047
组织学类型 Ⅰ型
Ⅱ型 37
27 0.45±0.39
0.41±0.36 0.41 0.632
分化程度 低分化
中高分化 24
40 0.47±0.27
0.48±0.29 0.28 0.816
肌层浸润深度 ≥1/2肌层
<1/2肌层 30
34 0.25±0.24
0.49±0.21 2.37 0.026
淋巴结是否转移 是
否 28
36 0.27±0.21
0.50±0.23 2.16 0.035
3 讨 论
子宫内膜癌恶性程度高,侵袭力强,患者预后不良。子宫内膜癌的发病过程复杂,癌基因与抑癌基因的异常表达与失衡导致肿瘤的形成及发展[9]。基因芯片技术研究证实一些miRNA参与调控子宫内膜癌的发生、发展。miRNA是一类具有调控功能的内源性非编码RNA,由17～25个核苷酸组成。miRNA是通过碱基互补配对结合特定位点,通常是3’非编码区,作用于靶基因mRNA,导致靶基因的降解和翻译抑制[10]。研究表明,这些miRNA可能是致癌基因或抑癌基因。如miR-185、miR-203、miR-205、miR-210、miR-200在子宫内膜癌中上调,表现为癌基因的功能[11];miR-30c、miR-221、miR-let7e、miR-152表达下调,表现为抑癌基因的功能[12]。
miR-195作为miRNA的一员,位于染色体17p13.1,属于miR15/16/424/497家族中的重要成员,该家族miRNA的表达与肿瘤的发生发展关系密切[13-14]。miR-195最早被预测发现并证实存在于小鼠体内,其在转基因小鼠肥厚心脏中呈特异性的高表达,此后发现在肺、肝、脾、肾、胃肠道以及脑组织中miR-195均有表达。研究显示,miR-195在多种肿瘤中表达下调,参与肿瘤细胞的增殖、凋亡、转移、侵袭等。如Shen等[15]采用RT-PCR检测发现胃癌患者血清中miR-195的表达量明显低于健康志愿者,提示血清miR-195可作为肿瘤诊断的分子标志物。Zheng等[16]研究证实miR-195在肝癌组织的表达较正常组织的表达显著下调,miR-195通过抑制肝癌细胞中CBX4的表达从而抑制肿瘤生长和转移。Guo等[17]发现,miR-195下调BCOX1在前列腺癌中的表达后抑制前列腺肿瘤的增殖和转移。
本研究结果显示,miR-195在子宫内膜癌组织中呈低表达,且FIGO分期Ⅲ～Ⅳ期 、肌层浸润深度≥1/2肌层以及发生淋巴结转移者miR-195相对表达量更低,提示miR-195在子宫内膜癌发生中可能有抑癌基因作用,其可能参与了子宫内膜癌的发展进程,但具体的分子生物学机制仍需要进一步研究证实。
利益冲突:所有作者均声明不存在利益冲突。
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