KAI1、TCF21及PTEN与非小细胞肺癌淋巴结微转移关系的研究

时间:2020-10-28 所属分类 论文指导 作者有话说:期刊信息纠错
  摘    要:目的 研究KAI1、TCF21及PTEN与非小细胞肺癌淋巴结微转移的关系。方法 回顾性分析本院2005年1月至2010年12月诊治的pN0期非小细胞癌(NSCLC)患者,按5年生存期分为复发组[pN0(+)组]、稳定组[pN0(-)组]。应用CK20mRNA、MUC1mRNA,采用反转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测pN0期复发组NSCLC淋巴结微转移情况,应用免疫组化法检测KAI1,TCF21及PTEN在淋巴结中表达情况,并分析其与淋巴结微转移之间关系。结果 56例pN0期NSCLC患者,其中复发组淋巴结微转移患者22例(39.29%),稳定组非淋巴结微转移患者34例(60.71%),且淋巴结微转移患者上述因子KAI1、TCF21及PTEN水平明显低于非淋巴结微转移患者(P <0.05)。结论 在NSCLC患者中,KAI1、TCF21及PTEN的表达水平与淋巴结微转移有关,其表达情况可以作为非小细胞肺癌转移及预后的指标。
  关键词:非小细胞肺癌 KAI1 TCF21 PTEN 淋巴结微转移

  肺癌是最常见的恶性肿瘤,早期肺癌以外科手术治疗为主,患者是否伴有微转移对预后影响明显。目前常规的病理检测方法及影像学检查对隐匿性的、微小的肺癌转移病灶或亚临床病灶的检出率较低[1]。随着分子生物学的不断发展,肿瘤标志物的表达变化已经具备评估NSCLC淋巴结微转移的能力,这对肺癌诊疗十分重要。KAI1/CD82蛋白存在于上皮细胞膜中,提示其与肿瘤细胞的增殖、黏附力、分化及凋亡有关[2]。TCF21基因(调节正常气道上皮分化)为抑癌基因之一,非小细胞肺癌肿瘤中TCF21较正常肺组织明显低表达。但是有关TCF21表达与NSCLC的相关性研究鲜有报道[3]。PTEN基因对乳腺癌等多种肿瘤的发生有影响。但其在NSCLC中的作用相关报道却很少。有研究[4]显示,细胞角蛋白(CK)和MUC1是判断非小细胞肺癌微转移的有效标志物,同样有研究显示淋巴结中CK20m RNA、MUC1m RNA作为标志物诊断可有效判断其微转移情况。本研究以CK20m RNA、MUC1m RNA作为参照,探讨KAI1、TCF21及PTEN与NSCLC淋巴结微转移之间的关系,以期为临床诊断及治疗提供帮助与参考。

  1 资料与方法

  1.1 一般资料
  选择我院2005年1月至2010年12月收治的p N0期NSCLC患者,按5年生存期分为复发组[p N0(+)组],稳定组[p N0(-)组]。以CK20m RNA、MUC1m RNA为标志物,使用反转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测证实随访5年复发组中术时存在淋巴结微转移者22例(39.29%)作为p N0(+)组;筛选34例(60.71%)5年随访稳定者作为p N0(-)组。患者中男30例,女26例,年龄41~72岁,平均年龄(52.9±8.90)岁。所有患者均符合国际抗癌联盟(UICC)肺癌的诊断标准。经大连市第五人民医院病理中心病理学确认和CK20m RNA、MUC1m RNA检测。
  1.2 主要仪器和试剂
  RT-PCR引物(上海吉凯合成),DNA marker、RNA提取及逆转录试剂盒、PCR仪(购自Abcam公司),Anti-TCF21antibody(Gene Tex,美国)、Anti-CD82/KAI1antibody(Novus,美国)、Anti-PTEN antibody(Boster,美国)、Cy3标记山羊抗兔Ig G(H+L)(Beyotime,中国)。
  1.3 标志物
  DNA marker,RNA提取及逆转录按照试剂盒操作说明进行,PCR扩增产物进行1.5%琼脂糖凝胶电泳。
  1.4 免疫组织化学方法
  脱蜡前,应该将组织芯片在室温中放置60 min或60℃恒温箱中烘烤20 min,组织芯片置于二甲苯中浸泡10 min,更换二甲苯后再浸泡10 min,无水乙醇中浸泡5 min,抗原修复:用于福尔马林固定的石蜡包埋组织芯片。高压热修复在沸水中加入EDTA(p H8.0)或0.01M枸橼酸钠缓冲溶液(p H6.0)。盖上不锈钢高压锅的盖子,同时将玻片置于金属染色架上,进行缓慢加压,使玻片在缓冲液中浸泡5min,然后将盖子锁定,小阀门将会升起来。10 min后,去除热源,置入凉水中,当小阀门沉下去后打开盖子。按照Allred score评分标准将免疫组化评分基于细胞染色强度评分及阳性细胞比例评分两部分。按照切片中细胞染色强度计分为0、1、2分。随机选取10个高倍视野,依照每高倍视野阳性细胞所占比例计算:1.00%~30.00%、31.00%~75.00%、76.00%~100.00%分别为1、2、3分。总评分为二者乘积,积分为0分表示阴性(-),积分为1~4分表示弱阳性(+),积分大于4分表示强阳性((++)。阳性表达率=(弱阳性例数+强阳性例数)/总例数×100%。
  1.5统计学方法
  数据统计采用SPSS20.0统计软件完成,计量资料用平均数±标准差(±s)表示,组间比较采用t检验;计数资料用(n,%)表示,组间比较采用卡方检验,P<0.05认为差异具有统计学意义。
  
  图1 免疫组织化学检测结果(HE×100)

  2 结果

  2.1 CK20m RNA、MUC1m RNA检测p N0期NSCLC淋巴结微转移情况分析
  经病理学确认以及CK20m RNA、MUC1m RNA检测,56例p N0期NSCLC患者中淋巴结微转移患者22例(39.29%)为p N0(+)组,非淋巴结微转移患者34例(60.71%)为p N0(-)组。与p N0(-)组相比,p N0(+)组CK20m RNA、MUC1m RNA水平增高。
  2.2 KAI1、TCF21、PTEN免疫组化检测结果
  免疫组化结果显示,p N0(+)组基因表达水平明显低于p N0(-)组。见图1。与p N0(-)组患者相比,p N0(+)组患者KAI1、TCF21及PTEN水平明显降低(P<0.05),见表2。
  表2 两组患者KAI1、TCF21及PTEN水平比较
  

  3 讨论

  非小细胞肺癌是一种肺部的恶性肿瘤,是我国常见的肿瘤,症状与原发病灶位置以及转移情况有着密切关系。目前并未有准确评估方法,同时也缺乏有效的评估微转移的分子标志物。本研究应用CK20m RNA、MUC1m RNA作为标志物,检测p N0期NSCLC淋巴结微转移情况,经病理学确认以及CK20m RNA、MUC1m RNA检测,56例患者中p N0(+)组患者22例(39.29%),p N0(-)组34例(60.71%)。与p N0(-)组相比,p N0(+)组CK20m RNA、MUC1m RNA水平增高。结果趋势与既往报道相符[5]。本研究分析肿瘤抑癌基因KAI1、TCF21及PTEN与NSCLC患者淋巴结微转移之间的联系后发现,与p N0(-)组患者相比,p N0(+)组患者上述3种基因水平均显着下降,这提示在NSCLC患者中,KAI1、TCF21及PTEN可能与淋巴结微转移有关。
  KAI1基因在多种肿瘤中存在差异性,容易造成患者肿瘤细胞黏附力降低,移动能力逐渐减弱,逐渐演变为恶性淋巴瘤。淋巴结转移的KAI1蛋白的表达几乎缺失,并由此推测KAI1可能与结肠癌的转移密切相关[6]。在本次实验中,结果显示,p N0(+)组KAI1蛋白的阳性表达率下降,提示其表达下调可能与NSCLC淋巴结微转移的发生、发展有关。TCF21基因在肿瘤的侵袭转移中发挥重要的作用[7]。研究表明[8],TCF21在黑色素瘤中能够上调KISS-1基因在蛋白中的表达,从而降低其侵袭能力,其与NSCLC分化程度及淋巴结转移密切相关。在本研究中,从TCF21的蛋白表达角度判断,认为TCF21蛋白的表达情况对肿瘤的生物学行为有着重要的作用。p N0(+)组患者TCF21蛋白的阳性表达率显着下降,提示远处转移风险增加、患者预后可能较差。PTEN能够抑制细胞生长、黏附、转化及迁移,促进细胞凋亡,对肿瘤生长和转移起到负向调控作用[9]。子宫内膜癌的PTEN突变率或缺失率高达50.00%~83.00%,此外,在胃癌、甲状腺髓样癌中,有关PTEN的研究也显示其可抑制肿瘤细胞增殖,与肿瘤分期密切相关。但PTEN在NSCLC中的相关研究却极为有限。本研究结果显示,在p N0(+)组患者中PTEN蛋白的阳性表达率显着下降。提示PTEN表达下调可能与非小细胞肺癌淋巴结微转移的发生、发展有关,这一结果与其他恶性肿瘤相关研究趋势相符合[10-11]。
  综上所述,本研究从KAI1、TCF21及PTEN的蛋白表达角度分析,认为KAI1、TCF21以及PTEN蛋白的低表达对非小细胞肺癌的生物学行为有着重要的作用,并可能预示肺癌发生微转移风险增加,影响患者预后,对于早期发现和预防肺癌转移具有重要理论及临床意义。但肿瘤的发生及转移是多因素作用的结果,因此,具体相关机制还有待继续研究探索。

  参考文献
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